抗體性能評估指標(biāo)

抗體作為主要的體外診斷試劑核心原料對于整個(gè)免疫檢測分析系統(tǒng)有著至關(guān)重要的影響。衡量抗體診斷原料質(zhì)量的技術(shù)指標(biāo)沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，一般以活性/效價(jià)/親和力、線性范圍、特異性、純度、重復(fù)性/批間差和穩(wěn)定性等作為抗體診斷原料的評估指標(biāo)。

活性/效價(jià)/親和力

活性/效價(jià)/親和力是反應(yīng)抗體與抗原之間反應(yīng)性的直接指標(biāo)。

大多數(shù)抗體供應(yīng)商對于效價(jià)的檢測是利用直接/間接ELISA方法測定抗體與重組或者天然抗原反應(yīng)，通過信號值對抗體診斷原料的活性進(jìn)行考察。但是需要注意，并不是高親和力的抗體就一定對應(yīng)為高性能的免疫檢測分析系統(tǒng)。不同種類的標(biāo)志物對于親和力的要求有一定區(qū)別，具體討論將在線性指標(biāo)中詳細(xì)展開討論。

線性范圍

線性范圍是指分析方法在給定范圍內(nèi)獲取與樣品中待測物濃度成正比的試驗(yàn)結(jié)果的能力，是反映分析方法檢測范圍和準(zhǔn)確性的直接指標(biāo)。線性范圍的確定需要再預(yù)期范圍內(nèi)選擇7-11個(gè)濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。

在活性/效價(jià)/親和力描述中提到，高親和力抗體診斷原料并不代表高性能試劑，針對不同種類的標(biāo)志物，對于親和力的需求有一定差異。這是因?yàn)橛行┐郎y標(biāo)志物在體內(nèi)的濃度范圍很寬，（如人絨毛膜促性腺激素(HCG)、肌紅蛋白(MYO)和C反應(yīng)蛋白（CRP）等）如果是高親和力的抗體，那么會導(dǎo)致鉤狀效應(yīng)的過早出現(xiàn)，提前進(jìn)入平臺期而引起信號下降，影響試劑盒的線性范圍，導(dǎo)至了高濃度樣本被嚴(yán)重低估，甚至可能導(dǎo)至醫(yī)療事故的產(chǎn)生。但是對于含量很低就能預(yù)示疾病且濃度范圍不寬的標(biāo)志物，（如肌鈣蛋白（TnI）和降鈣素原（PCT）等）高親和力的抗體就具有檢出低值樣本的能力，也相應(yīng)提高了檢測的靈敏度。

特異性

指抗體單一性識別某種特定抗原的能力。如何能在混合物中識別特定的抗原也是評估抗體的重要指標(biāo)。特異性雖然不直接影響試劑整體反應(yīng)性，但是卻對于檢測結(jié)果有著很重要的影響。

血清中除了待測標(biāo)志物之外，還存在許多其他分子。這些分子可能和待測物具有類似的結(jié)構(gòu)或構(gòu)象；也可能與待測物存在共同的氨基酸片段。當(dāng)抗體所識別的表位也存在于其他分子中時(shí)，便會導(dǎo)至測試結(jié)果的假陽性或者假陰性。如心肌肌鈣蛋白（cTnI）和骨骼肌肌鈣蛋白（sTn）直接存在多段相同的氨基酸序列；促甲狀腺激素（TSH）、促卵泡生成激素（FSH）、促黃體生成激素（LH）和人絨毛膜促性腺激素（HCG）存在共同的α亞基等。肌紅蛋白（MYO）與血紅蛋白均具有血紅素核心、地高辛和洋地黃毒苷具有類似的糖苷結(jié)構(gòu)、糖抗原CA50和CA19-9均有Lewis-A糖抗原等。這既是抗體診斷原料特異性差所導(dǎo)至的結(jié)果，也可以理解為抗體識別的抗原表位不夠?qū)Ｒ凰?。因此，抗體的識別位點(diǎn)是決定抗原特異性的關(guān)鍵性因素。

純度

抗體的純度測定主要有SDS-PAGE電泳后的條帶掃描和HPLC測試等。以proteinA/G親和純化的方法可以獲得較高純度的抗體。

在體外診斷試劑制備過程中，抗體標(biāo)記效率與抗體的純度有關(guān)。當(dāng)抗體純度較低時(shí)，會導(dǎo)致抗體與其他雜蛋白被一起標(biāo)記，從而影響了試劑的反應(yīng)性能，如特異性、反應(yīng)信號、背景值等。抗體的純度通常由細(xì)胞培養(yǎng)工藝和抗體純化工藝所決定。使用無血清培養(yǎng)基可以很大程度上去除血清培養(yǎng)基中帶來的雜質(zhì)蛋白，而蛋白質(zhì)純化工藝則可以進(jìn)一步將抗體中絕大多數(shù)雜質(zhì)去除。

重復(fù)性/批間差

重復(fù)性是指每批次產(chǎn)品的可重復(fù)性。之前所述的一系列抗體性能對于體外診斷試劑的性能有直接影響，而重復(fù)性則是保證體外診斷試劑降低批間差異并且穩(wěn)定生產(chǎn)的前提條件。另外，如前所述，重復(fù)性和生產(chǎn)工藝密切掛鉤，因此也是體現(xiàn)抗體診斷原料質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。（抗體診斷試劑重復(fù)性評估）

穩(wěn)定性

是指在特定的儲存條件下，一定時(shí)間內(nèi)抗體保持其活性的能力。在抗體修飾/偶聯(lián)前的穩(wěn)定性是抗體真實(shí)的穩(wěn)定性，修飾/偶聯(lián)后的抗體穩(wěn)定性主要取決于制備工藝?？贵w診斷原料的保存條件對于抗體的穩(wěn)定性至關(guān)重要，目前多數(shù)供應(yīng)商提供的抗體的儲存條件為4或-20℃；常規(guī)抗體的稀釋液大多數(shù)為不含有其他蛋白和保護(hù)劑的緩沖液（抗體中若含有其他蛋白或者保護(hù)劑，會影響抗體的后續(xù)偶聯(lián)）。

對于37℃加速穩(wěn)定性，有企業(yè)認(rèn)為，試劑在37?C放置3d相當(dāng)于4?C放置半年，37?C放置7d相當(dāng)于4?C放置1年，半年的加速穩(wěn)定性研究后可以將產(chǎn)品效期穩(wěn)定性定為2年，這些說法是缺乏科學(xué)依據(jù)的。由于體外診斷試劑結(jié)構(gòu)組成比較復(fù)雜，可能同時(shí)存在多種降解途徑，不同條件下的降解、聚合、變性、失活，以及與包裝材料之間的相互作用等各不相同，所以一般情況下，加速穩(wěn)定性研究只能用于產(chǎn)品一般性能研究，不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期。（穩(wěn)定性研究方法介紹）

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